一、PCR实验室的污染来源　　　　1、样本间交叉污染：收集样本的容器被污染或样本密封不严外溢；不同样本移液时忘记更换枪尖或未使用带滤芯枪尖；移液器等实验器具及耗材未及时消毒灭菌；不同样本同时开盖或样本剧烈震荡、反复吹吸导致气溶胶形成扩散，相互交叉污染。　　　　2、实验试剂污染：在试剂配制过程中，掺入核酸模板导致污染。　　　　3、扩增产物污染：大量拷贝的产物泄漏或扩增后的PCR反应管意外开盖。　　　　4、克隆质粒污染：作为阳性质控品的克隆质粒外溢。

　　二、PCR实验室的防污染方法　　　　1、合理的实验室分区：试剂准备区、样本制备区和扩增区内的实验用品，包括移液器等器具应专用，空气、物品流向依次为：试剂准备区、样本制备区、扩增区、产物分析区，不可逆行。　　　　2、清洁的实验用品：实验室自配试剂（去离子水、缓冲液等）和所有使用器具在使用之前均应高压灭菌或紫外杀菌。枪尖、反应管等实验耗材应一次性使用。　　

三、正确的实验操作　　　　1、实验应在超净工作台内进行，工作台内应放置PCR专用的微量离心机、各量程的移液器和其他必须物品。　　　　2、实验的过程中选择最合适尺寸的手套并能及时更换，在进出不同实验区域或进行模板操作后都应更换实验服、口罩、帽子及手套，以避免不同实验区交叉污染。　　　　3、装有PCR试剂的反应管在打开之前应先瞬时离心，将管壁及管盖上的液体离至管底，降低污染手套或加样器的风险。谨慎开启反应管，防止管内液体溅出或形成气溶胶导致污染。　　　　4、吸加试剂和模板的操作应严格按照规范要求进行，遵守“慢吸快打”原则，尽量一次性完成，忌多次抽吸，以避免气溶胶产生的交叉污染。　　　　5、PCR试剂建议小量分装，以减少反复冻融、重复取样次数。多样本PCR反应时，先配制反应混合液分装至反应管中，最后加入样本核酸，请勿同时开盖，尽量保证单人单管，实现完全闭管操作。　　　　6、实验试剂应与样品和PCR产物分开保存，不应放于同处。　　　　7、PCR扩增实验完成后及时将反应管取出，用一次性手套将产物反应管包裹丢弃，保证管盖紧闭。　　
　　

四、规范的实验设计：应遵循实验室内部质量控制的相关规定，实验中设立阳性对照、阴性对照和空白对照，全程质控实验过程，验证PCR反应的可靠性，并协助判断扩增系统的可信性。
五、PCR实验室的污染应急处理方法　　　　1、若核酸样本溢出：应立即用布或纸巾覆盖，由外围向中心倾倒10%的次氯酸消毒剂，约30分钟后，清除污染物品，再用次氯酸消毒剂擦拭，并用75%酒精喷洒，移动紫外车定点照射1小时。　　　　2、其他不明情况污染：应暂停所有实验操作，清理实验室内所有物品，寻找污染来源。同时加大实验室的通风，对实验室内所有表面（台面、地面及墙面） 进行消毒，用75%酒精空中喷雾。开启紫外消毒装置，延长紫外照射时间（4小时以上）。以上措施每日进行，直至污染消除；用新试剂及确认无污染的器材进行原污染项目的试剂空白检测，连续3次均阴性后方可进行常规检测。

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