《Adv Sci》解读：研究KEAP1与PGAM5结合的区域 
💡第一步，确定KEAP1与PGAM5结合的结构域及潜在氨基酸
KEAP1可以与PGAM5结合，它们结合的结构基础尚不清楚（图1a）。PGAM5是磷酸甘油突变酶超家族的成员，包含一个PGAM结构域、TM结构域、MM结构域和一个与KEAP1相互作用的NxESGE基序（图1b）。而KEAP1则有NTR域、BTB域、IVR域、Kelch域和CTR域，Kelch域负责与PGAM5结合（图1c）。分子动力学模拟和轨迹聚类研究，以及结合AlphaFold3算法的预测结果，提示PGAM5上的Val78、Glu79、Ser80和Glu83氨基酸主要与KEAP1的Kelch结构域相互作用（图1d-g）。
💡第二步，确定KEAP1与PGAM5结合的氨基酸
为了更好地了解KEAP1和PGAM5相互作用的分子机制，依次进行结构生物学实验、ITC实验、晶体学实验，暗示Glu79可能在ESGE基序与KEAP1结合的过程中起着至关重要的作用（图1h-i）。随后合成一个基于20-mer肽的E79A突变体，并进行ITC实验。显示E79A突变体的结合亲和力明显降低（图1j）。表明Glu79是Kelch与PGAM5
结合的关键残基。
图1 Glu79是Kelch与PGAM5结合的关键残基（Ref. Fig 3/4）
全文分享请查阅：药靶开发|《Adv Sci》解读：HuProt™蛋白芯片筛选抗癌化合物结合蛋白！冬凌草乙素稳定KEAP1-PGAM5抑制肝癌进展。
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为了更好地了解KEAP1和PGAM5相互作用的分子机制，依次进行结构生物学实验、ITC实验、晶体学实验，暗示Glu79可能在ESGE基序与KEAP1结合的过程中起着至关重要的作用（图1h-i）。随后合成一个基于20-mer肽的E79A突变体，并进行ITC实验。显示E79A突变体的结合亲和力明显降低（图1j）。表明Glu79是Kelch与PGAM5
结合的关键残基。
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